一、灭菌法定义

用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。适用于制剂、原料、辅料、医疗器械等的灭菌。

灭菌是指将物品中污染的微生物残存概率下降至一定水平，以无菌保证水平SAL(Sterility  Assurance  Level)表示。

二、灭菌程序验证内容

1、撰写验证方案及制定评估标准。

2、确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，并能处于正常运行。

3、确认关键设备控制仪表在规定的参数范围内能正常运行。

4、采用被灭菌物品或模拟物品进行重复实验确认灭菌效果符合规定。

5、完善文件记录，撰写验证报告。

三、灭菌程序运行监控

1、 关键参数应在验证确定的范围内：温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度、辐照剂量等

2、灭菌程序定期验证，时效不超过半年。

3、灭菌设备或程序发生变更重新进行验证。

四、灭菌保证

1、灭菌效果与灭菌前产品污染程度及污染菌特性有关，把握微生物污染水平及污染菌耐受性，注意各个环节降低污染程度。

2、灭菌冷却阶段防止已灭菌物品再次污染。

3、适用生物指示剂、化学指示剂等监控灭菌结果。

五、生物指示剂

基本要求：

1、菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染菌的耐受性。

2、菌种应无致病性。

3、菌株应稳定，存活期长，易于保存。

4、 易于培养。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。

六、常用生物指示剂

1、湿热灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为5×10⁵～5×10⁶个/片 )

2、干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×10⁵～5×10⁶个/片 )

3、辐射灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×10⁷～5×10⁸个/片 )

4、气体灭菌：

 环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×10⁵～5×10⁶个/片 )；

气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为1×10⁶～5×10⁶个/片 )；

过滤除菌法：缺陷假单胞菌（ ATCC19146等）。

七、灭菌方法

方法：湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭菌法、气体灭菌法、过滤除菌法。

根据灭菌物品特性选择一种或几种方法组合灭菌。只要产品允许，尽可能选用最终灭菌法。

（一）、湿热灭菌法

湿热灭菌法是指在高温高压条件下利用沸水、蒸气变性微生物菌体中的蛋白质、核酸而达到灭菌效果的方法。

湿热灭菌法效果可靠、操作简便；应用广泛，如容器、培养基、无菌衣、胶塞等；包括热压灭菌、流通蒸汽灭菌、 煮沸灭菌、低温间歇灭菌。

湿热灭菌条件：

1、121℃× 15min、 121℃× 30min 、116℃ × 40min 或其他可以保证灭菌效果的程序条件。

2、过度杀灭法。

3、灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有效均一。

灭菌容器操作注意：

1、使用前认真检查设备的完好性；

2、灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保证最佳灭菌效果；

3、灭菌时间应从待灭菌物品到达预定温度时算起；

4、灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放汽、开启灭菌器，物品温度降至80℃ 以下时才能将灭菌器门全部开启。

影响湿热灭菌的因素：

1、微生物种类和数量；

2、灭菌物品特性；

3、蒸汽的性质：饱和蒸汽热含量高、潜热大、穿透力强；湿饱和蒸汽热含量低、过热蒸汽穿透力差；

4、灭菌时间等。

（二）、干热灭菌法

利干热灭菌法用干热空气达到杀灭微生物或消除热原的方法。

适用范围：耐高温但不宜使热灭菌法灭菌的物品，如玻璃物品、金属物品、纤维制品、固体试药、液体石蜡等

干热灭菌条件：

1、160～170℃× 120min、 170～180℃× 60min、250 ℃× 45min以上。

2、灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有效均一。

干热灭菌效果：

1、繁殖型细菌100℃ /1h可杀灭；

2、耐热细菌: 120℃ 长时间不死亡,140 ℃杀菌率剧增。

（三）、火焰灭菌

置于火焰上直接灼烧，简便、可靠。

（四）、辐射灭菌法

将灭菌物品置于适宜放射源辐射的射线或适意的电子加速其发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法。

常用60Co-γ射线；用于医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等。参数：辐射剂量。

辐射灭菌特点：

1、γ射线 ，60Co穿透力强；

2、β射线，由电子加速器产生，穿透力弱，灭菌效果差；

3、不升高温度；

4、设备费用高；

5、辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，某些制品不宜选用。

（五）、气体灭菌法

用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方法，常用环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、臭氧等。适用于医疗器械、塑料制品等，能吸附环氧乙烷的物品不宜采用。控制参数：温度、相对湿度、灭菌压力、灭菌时间等。

（六）、过滤除菌法

利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理除去气体或液体中的微生物。用于热不稳定的药品或原料除菌；滤膜材料确定。

滤膜孔径要求

1、繁殖型微生物1um，芽孢约0.5um或以下；

2、0.45um可滤去大多数细菌，0.15um可滤去热原。

（七）、物理灭菌法

（八）、化学灭菌法